RNA紫外交聯(lián)強度是多少？

rna紫外交聯(lián)強度是多少？

RNA紫外交聯(lián)強度通常為120mJ/cm2.

紫外線進(jìn)行光交聯(lián)反應(yīng)

光化學(xué)反應(yīng)是指物質(zhì)在可見光或紫外線照射下，物質(zhì)分子吸收光子后所引發(fā)的化學(xué)反應(yīng)。而基于光化學(xué)反應(yīng)的光交聯(lián)則是其重要應(yīng)用之一。光交聯(lián)反應(yīng)是指將合成的光敏小分子化合物作為工具探針，在特定波長的光照射下，產(chǎn)生高活性的中間體，與其受體活性部位形成特異性的不可逆共價鍵結(jié)合的化學(xué)反應(yīng)。

在分子生物學(xué)中，常使用紫外線進(jìn)行光交聯(lián)反應(yīng)，用于鄰近分子的交聯(lián)。紫外線為波長在10nm至400nm之間的電磁波。紫外交聯(lián)主要介導(dǎo)蛋白質(zhì)與RNA的分子共價連接，常用紫外線波長有254nm和365nm兩種。其中254nm UV照射下，RNA 中的核苷酸和蛋白質(zhì)中的氨基酸會產(chǎn)生光化學(xué)反應(yīng)，轉(zhuǎn)變?yōu)榛钚誀顟B(tài)，進(jìn)而形成分子間共價交聯(lián)，不過254nm UV介導(dǎo)的分子交聯(lián)效率偏低（HIST-CLIP使用254nm UV進(jìn)行交聯(lián)）；而365nm UV則可以介導(dǎo)光敏分子，例如4SU與蛋白質(zhì)的高效交聯(lián)（PAR-CLIP使用365nm+4SU進(jìn)行交聯(lián)）。

紫外交聯(lián)免疫沉淀

 紫外交聯(lián)免疫沉淀(crosslinking-immunprecipitation, clip) 結(jié)合高通量測序，即CLIP-Seq又稱為HITS-CLIP。

CLIP- Seq，全稱為cross linking-immun precipitation and high throughput sequencing，意思是紫外交聯(lián)免疫沉淀結(jié)合高通量測序，是一項在全基因組水平揭示RNA分子與RNA結(jié)合蛋白相互作用的技術(shù)，其主要原理是基于RNA分子與RNA結(jié)合蛋白在紫外照射下發(fā)生耦聯(lián)，以RNA結(jié)合蛋白的特異性抗體將RNA-蛋白質(zhì)復(fù)合體沉淀之后，回收其中的RNA片段，經(jīng)添加接頭、RT-PCR等步驟，再對這些分子進(jìn)行高通量測序和生物信息學(xué)的分析，進(jìn)而深入揭示RNA結(jié)合蛋白與RNA分子的調(diào)控作用及其對生命的意義。