綠色熒光蛋白在分子和細胞生物學(xué)中的應(yīng)用越來越多。由于應(yīng)用的多樣性，已經(jīng)開發(fā)出形成原始野生型綠色熒光蛋白（wtGFP）的幾種變體。這些變體中的幾個具有與wtGFP不同的激發(fā)和發(fā)射光譜。為了在定量這些GFP時獲得zui大的靈敏度，重要的是使用zui合適的激光光源。在這里，我們表征了一些常用的GFP變體的激發(fā)和發(fā)射光譜，并建議使用LUYOR-3410和LUYOR-3415便攜式熒光蛋白激發(fā)光源觀察。
wtGFP蛋白zui常用的突變可分為三類：
（1）紅移變體；
（2）像變體一樣的野生型；
（3）發(fā)出藍色光的變體。如圖1所示，以EGFP為代表的紅移變體具有一個集中在約488 nm處的單個激發(fā)峰，發(fā)射峰波長為509 nm。類似野生型的變體的主要激發(fā)峰位于395 nm，發(fā)射峰位于509 nm，而發(fā)出藍色的突變體通常在380 nm附近有一個激發(fā)峰，在460 nm附近有一個發(fā)射峰（圖1）。
表1. GFP變體的激發(fā)波長和發(fā)射波長數(shù)據(jù)
| GFP的變體 | 激發(fā)波長EX (nm) | 發(fā)射波長EM (nm) | LUYOR-3415對應(yīng)波段 |
| wtGFP | 395 | 509 | UV |
| GFPuV | 395 | 509 | UV |
| Stemmer | 395 | 509 | UV |
| EGFP | 488 | 509 | RB |
| GFP-S65T | 489 | 509 | RB |
| Y66H | 382 | 459 | UV |
| EBFP | 380 | 460 | UV |
LUYOR-3415RG熒光蛋白激發(fā)光源照射植物根系，GFP在植物根系的表達
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