很多同學覺得GFP和EGFP、avGFP都是綠色熒光蛋白,激發(fā)波長應(yīng)該都一樣,用便攜式熒光蛋白激發(fā)光源的450nm波段去觀察GFP的表達,但有時候無法看到gfp的熒光表達,不知道是設(shè)備原因還是沒有表達成功。
大家在觀察熒光蛋白表達之前,一定要看自己質(zhì)粒圖譜用的到底是哪種GFP,如果是GFP、wtGFP、avGFP必須用紫外光源去激發(fā)(365nm波段,LUYOR-3280UV),如果的eGFP、mEGFP那要藍光波段(450nm LUYOR-3280RB)去激發(fā)。
下面是幾種綠色熒光蛋白的激發(fā)波長和發(fā)射波長圖譜:
GFP又名 wtGFP, avGFP, gfp10, 綠色熒光蛋白
GFP綠色熒光蛋白是一種基本的(構(gòu)成熒光的)長斯托克斯位移熒光蛋白,發(fā)表于1992年,來源于Aequorea victoria。它對酸的敏感性低。GFP激發(fā)光的波長是395nm,mEGFP發(fā)射光的波長是509nm。
圖一:wtGFP, avGFP熒光蛋白的激發(fā)光和發(fā)射光
EGFP又名增強型GFP,GFPmut1
EGFP綠色熒光蛋白是1996年發(fā)表的一種堿性(構(gòu)成性熒光)綠色熒光蛋白,來源于Aequorea victoria。據(jù)報道,它是一種快速成熟的弱二聚體,具有中等酸敏感性。mEGFP激發(fā)光的波長是488nm,mEGFP發(fā)射光的波長是507nm
圖二:eGFP熒光蛋白的激發(fā)光和發(fā)射光
mEGFP綠色熒光蛋白
mEGFP綠色熒光蛋白是2002年發(fā)表的一種堿性(構(gòu)成性熒光)綠色熒光蛋白,來源于Aequorea victoria。它具有中等酸敏感性。mEGFP激發(fā)光的波長是488nm,mEGFP發(fā)射光的波長是507nm。
圖三:mEGFP熒光蛋白的激發(fā)光和發(fā)射光
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圖五:GFP在水稻種子上的表達
綠色熒光蛋白的激發(fā)和發(fā)射波長
熒光蛋白 | 激發(fā)光EX(nm) | 發(fā)射光EM(nm) |
TagGFP | 482nm | 505nm |
cgigGFP | 399 | 496 |
fabdGFP | 508 | 520 |
EGFP | 488 | 507 |
CGFP | 463 | 506 |
mmGFP | 398 | 505 |
muGFP | 490 | 508 |
oxGFP | 486 | 510 |
usGFP | 490 | 508 |
mEGFP | 488 | 507 |
eYGFP | 507 | 516 |
avGFP | 395 | 509 |
cEGFP | 489 | 507 |
EaGFP | 506 | 514 |
dfGFP | 505 | 524 |
ECGFP | 463 | 506 |
laGFP | 502 | 511 |
hmGFP | 490 | 510 |
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