經(jīng)常有同學(xué)咨詢,看到文獻里面很多熒光蛋白的照片非常漂亮,不知道怎么拍攝,上海峰志儀器有限公司的技術(shù)工程師將熒光蛋白表達的拍攝方法給大家說一下,供大家參考。
上圖:紅色熒光蛋白在愈傷上的表達
熒光蛋白表達的拍攝工具:
光源:光源用于激發(fā)熒光蛋白發(fā)出熒光,如果視野很大,建議購買LUYOR-3415系列GFP激發(fā)光源,這款照射面積大,激發(fā)熒光亮度高,拍攝效果非常好。
單反相機:常規(guī)的單反相機均可。
拍照濾鏡:根據(jù)拍攝的熒光蛋白種類,要選擇合適的熒光蛋白拍照濾鏡,拍照濾鏡是將激發(fā)光源的激發(fā)光過濾掉,讓熒光蛋白的熒光通過,這樣單反相機就能呈現(xiàn)精美的熒光照片。
暗室:因環(huán)境明亮光線,影響大熒光的拍攝,拍攝周圍光線越暗,拍攝效果約好,如果沒有暗室,可以選擇夜晚拍攝。
熒光蛋白表達的拍攝技巧:
將單反相機檔位撥到手動檔位(M檔),調(diào)整光圈、ISO、和快門速度三個參數(shù)到合適值。
將選擇好的熒光蛋白拍照濾鏡安裝到單反相機鏡頭上。
將LUYOR-3415系列GFP激發(fā)光源安裝到臺式支架上,打開光源開關(guān)。
調(diào)整合適角度,相機對焦到拍攝目標(biāo)上,拍攝即可。
說明:
如果是拍攝葉片上的GFP或eGFP的表達,葉片上的葉綠素在450nm激發(fā)光照射下會發(fā)出強烈的紅色熒光,如果GFP或eGFP的表達量不高的話,會拍攝不到熒光蛋白的表達,這時候建議不用LUV-495A拍照濾鏡,用LUV-520A綠色濾鏡拍攝,LUV-520A綠色濾鏡只允許綠色波段通過,葉綠素?zé)晒獗桓綦x掉了。